Nippon Gene
 
작성일 : 14-03-31
[Nippon Gene] GMO DNA Extraction Kit for processed food


GM quicker 3, GMO DNA Extraction Kit for processed food

 

GM quicker 3은 가공식품에서 DNA를 추출하기 위한 키트입니다.  본 키트는 chaotropic ion 존재 하에서 DNA가 실리카에

흡착하는 원리 (Boom Technology)를 사용하고 있어, 추출 작업에 phenol과 chloroform 등 독성 유기용매를 사용하지

않습니다. 유전자변형농산물 (GMO)의 검사에서는 DNA를 이용한 방법이 널리 보급되고 있습니다만,  지금까지 DNA 추출

키트는 조각난 DNA의 회수를 목적으로 설계하지 못했기 때문에 물리적 또는 화학적인 요인에 의해 조각난 DNA를 포함하는

가공식품에서의 DNA 추출은 반드시 효율적이지 않았습니다.


본 키트는 추출 대상을 가공식품으로 최적화하여 약 2시간 이라는 짧은 시간으로 PCR에 적합한 품질의 DNA를 추출 할 수

있습니다. 사용하는 스핀 컬럼은 컬럼 양을 최대한 확보하고, 안 봉 된 실리카 겔 막은 충분한 DNA 흡착 용량과 높은 용출

효율을 확보하고 있습니다. 사용되는 spin column은 컬럼 용적을 최대한 확보하고, 내부 밀봉된 실리카 겔 막(membrane)은

충분한 DNA 흡착 용량과 높은 용출 효율을 확보하고 있습니다.


본 키트에 의해 추출된 DNA는 PCR과 제한효소 반응에 적용할 수 있습니다.



키트 구성

구성품명

용량

저장

GE1 Buffer

100 ml × 3 개

실온 보관

GE2-P Buffer

30 ml × 1 개

실온 보관

GB3 Buffer

12.5 ml × 3 개

실온 보관

GW Buffer

40 ml × 1 개

실온 보관

TE ( pH8.0 )

10 ml × 1 개

실온 보관

RNase A (100mg/ml)

0.5 ml × 1 개

실온 보관

Proteinase K (20mg/ml)

1 ml x 2 개

냉동보관 (- 20℃)

α-Amylase (고농도)

0.1 ml x 1 개

냉동보관 (- 20℃)

Spin Column

 50 개

냉장 보관 (2 ~ 8℃)

설명서

1 부

-

• RNase A는 실온 보관이 가능하지만, 장기간 사용하지 않을 경우에는 냉장보관 (2 ~ 8℃)을 권장합니다.

• GW Buffer에는 에탄올이 포함되어 있기 때문에, 증발을 방지하기 위해 반드시 뚜껑을 닫아주세요.

• 구성품의 spin column은 냉장보관 (2 ~ 10℃)을 해야 높은 DNA 수율을 유지할 수 있습니다. 키트에 포함된

  "Spin Column"은 제품을 받는 즉시, 냉장 보관 (2 ~ 10℃) 하여 주세요.


사용법 1 : 건조 시료나 흡수성이 강한 가공식품에서의 DNA 추출

 1. 시료를 food mill 등으로 분쇄합니다.

 2. 2ml conical tube에 1.0g의 분쇄 시료와 4.5ml의 GE1 Buffer, 40μl 의 proteinase K, 2μl의 α - Amylase 

    및 10μl의 RNase A를 각각 첨가한다.  벽면에 붙어있는 시료와 버퍼를 flash 원심하여 튜브에 바닥에 모은

    후. 시험관 믹서를 이용하여 균질화되도록 30초 이상 교반합니다. (*1)

 3. 30분간 65℃에서 가온하고, 10분 마다 2회 시험관 믹서를 이용하여 10초간 최대 속도로 교반합니다

 4. 500μl의 GE2-P Buffer를 첨가하여 시험관 믹서로 잘 혼합합니다.

 5. 원심분리 (≧ 4K × g, 10분간 4℃) 합니다. (*2)

 6. 상청액 800μl 정도를 2.0ml의 새 micro-tube로 옮깁니다. (*3)

 7. 600μl의 GB3 Buffer를 첨가 한 후 10 ~ 12회 튜브를 강하게 뒤집어 잘 혼합합니다.

 8. 원심분리 (≧ 10K × g, 5분간 4℃) 하여 상층액을 가능한 한 채취합니다. (*4)

 9. #8의 상청액을 Spin Column에 700μl 옮기고, 원심분리 (≧ 10K × g, 30초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

10. #8의 남은 상청액 전량을 #9의 Spin Column에 옮긴 후, 원심분리 (≧ 10K × g, 30초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

11. 600μl의 GW Buffer를 Spin Column에 첨가 한 후, 원심분리 (≧ 10K × g, 60초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

12. Spin Column을 새 1.5 ml 마이크로 튜브에 옮깁니다.

13. 50μl의 TE (pH8.0)을 떨어뜨린 후 3분간 실온에 방치합니다.

14. 원심분리 (≧ 10K × g, 60초간 4℃) 하고 여과액을 회수합니다.


사용법 2 : 수분을 비교적 많이 포함하여 흡수성이 약한 가공식품에서의 DNA 추출

 1. 시료를 food mill 등으로 분쇄합니다.

 2. 50ml conical tube에 1.0g의 분쇄 시료와 1ml의 GE1 Buffer, 20μl 의 proteinase K, 2μl의 α - Amylase 

    및 10μl의 RNase A를 각각 첨가한다.  벽면에 붙어있는 시료와 버퍼를 flash 원심하여 튜브에 바닥에 모은

    후. 시험관 믹서를 이용하여 균질화되도록 30초 이상 교반합니다. (*1)

 3. 30분간 65℃에서 가온하고, 10분 마다 2회 시험관 믹서를 이용하여 10초간 최대 속도로 교반합니다

 4. 200μl의 GE2-P Buffer를 첨가하여 시험관 믹서로 잘 혼합합니다.

 5. 원심분리 (≧ 4K × g, 10분간 4℃) 합니다. (*2)

 6. 상청액 800μl 정도를 2.0ml의 새 micro-tube로 옮깁니다. (*3)

 7. 600μl의 GB3 Buffer를 첨가 한 후 10 ~ 12회 튜브를 강하게 뒤집어 잘 혼합합니다.

 8. 원심분리 (≧ 10K × g, 5분간 4℃) 상층액을 가능한 한 채취합니다. (*4)

 9. #8의 상청액을 Spin Column에 700μl 옮기고, 원심분리 (≧ 10K × g, 30초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

10. #8의 남은 상청액 전량을 #9의 Spin Column에 옮긴 후, 원심분리 (≧ 10K × g, 30초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

11. 600μl의 GW Buffer를 Spin Column에 첨가 한 후, 원심분리 (≧ 10K × g, 60초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

12. Spin Column을 새 1.5 ml 마이크로 튜브에 옮깁니다.

13. 50μl의 TE (pH8.0)을 떨어뜨린 후 3분간 실온에 방치합니다.

14. 원심분리 (≧ 10K × g, 60초간 4℃) 하고 여과액을 회수합니다.


사용법 3 : DNA의 잔존이 적은 가공식품에서의 DNA 추출

 1. 시료를 food mill 등으로 분쇄합니다.

 2. 50ml conical tube에 1.0g의 분쇄 시료와 4ml의 GE1 Buffer, 10μl 의 proteinase K, 2μl의 α - Amylase 

    및 10μl의 RNase A를 각각 첨가한다.  벽면에 붙어있는 시료와 버퍼를 flash 원심하여 튜브에 바닥에 모은

    후. 시험관 믹서를 이용하여 균질화되도록 30초 이상 교반합니다. (*1)

 3. 30분간 65℃에서 가온하고, 10분 마다 2회 시험관 믹서를 이용하여 10초간 최대 속도로 교반합니다

 4. 400μl의 GE2-P Buffer를 첨가하여 시험관 믹서로 잘 혼합합니다.

 5. 원심분리 (≧ 4K × g, 5분간 4℃) 합니다. (*2)

 6. 상청액 1ml를 2.0ml의 새 micro-tube로 옮깁니다. (*3)

 7. 750μl의 GB3 Buffer를 첨가 한 후 10 ~ 12회 튜브를 강하게 뒤집어 잘 혼합합니다.

 8. 원심분리 (≧ 10K × g, 5분간 4℃) 상층액을 가능한 한 채취합니다. (*4)

 9. #8의 상청액을 Spin Column에 700μl 옮기고, 원심분리 (≧ 10K × g, 30초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

10. #8의 남은 상청액 전량을 #9의 Spin Column에 옮긴 후, 원심분리 (≧ 10K × g, 30초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

11. 600μl의 GW Buffer를 Spin Column에 첨가 한 후, 원심분리 (≧ 10K × g, 60초간 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

12. Spin Column을 새 1.5 ml 마이크로 튜브에 옮깁니다.

13. 50μl의 TE (pH8.0)을 떨어뜨린 후 3분간 실온에 방치합니다.

14. 원심분리 (≧ 10K × g, 60초간 4℃) 하고 여과액을 회수합니다.


(* 1) 교반작업이 충분하지 않으면, DNA의 수율이 크게 감소합니다. 또한 튜브시험관 믹서에 비스듬히 대고하면 거품이

      대량으로 발생하여 교반효율이 떨어집니다. 시험관 믹서에 튜브수직으로 대고, 그대로 30초 동안 강하게 교반

      합니다. 교반불충분하다고 판단되면 다시 30~60초간 교반실시합니다.

(* 2) 사용하는 냉장 원심분리기로터최고 회전수 튜브최대 내력을 확인합니다.

(* 3) 침전물이나 상층 표면에 떠 있는 모양의 물질을 가능한 한 포함되지 않도록 주의하여 상청액을 채취합니다.

(* 4) 침전물이나 상층 표면에 떠 있는 모양의 물질이 있으면 가능한 포함되지 않도록 상청액을 새로운 2.0 ml 튜브로

      옮깁니다.



실험 예

1. 본 키트로 추출한 DNA의 agarose gel 전기 영동

   본 키트의 사용법 3에 따라 감자스낵(Potato snack)에서 DNA를 추출했다. 어떤 감자스낵에서도 DNA를 추출 할 수 있었다.

   본 키트의 사용법 3에서 추출한 DNA 용액의 1/25 분량을 1% Agarose S로 전기영동했다.

  

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Lane M : OneSTEP Marker 6 (λ / Sty I digest)

Lane 1, 2 : 감자스낵 A 유래의 DNA

Lane 3, 4 : 감자스낵 B 유래의 DNA

Lane 5, 6 : 감자스낵 C 유래의 DNA


2. PCR에 의한 내인성 유전자의 검출

   콩, 옥수수 및 감자의 내재성 유전자 검출용 primer pair를 이용하여 본 키트로 추출한 DNA 용액을 희석하지 않고 주형으로

   이용하여 PCR을 수행하였다.

   PCR 산물의 일부 (5μl)를 3% Agarose 21 gel로 전기 영동

   Lane 1 ~ 9는 Le1 유전자 (118 bp)를 증폭, Lane 10 ~ 13은 SSⅡ b 유전자 (114 bp)를 증폭, Lane 14 ~ 16는 UGPase

   유전자 (111 bp)를 증폭했다


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  Lane M : OneSTEP Marker11 (pUC19/Msp I digest)


<콩 가공식품>

Lane 1 : Soybean flour

Lane 4 : 두부

Lane 7 : 낫토(Fermented soybeans. A

Lane 2 : Dried beancurd

Lane 5 : 두유

Lane 8 : 낫토(Fermented soybeans) B

Lane 3 : 냉동두부

Lane 6 : 물에 끓인 대두

Lane 9 : 낫토(Fermented soybeans) C


<옥수수 가공식품>

Lane 10 : 옥수수 통조림

Lane 11 : 옥수수 스낵 A

Lane 12 : 옥수수 스낵 B

Lane 13 : 옥수수 분말


<감자 가공 식품>

Lane 14 : 감자 스낵 A

Lane 15 : 감자 스낵 B

Lane 16 : 감자 스낵 C


 

Reference

1. Takabatake R, Noritake H, Noguchi A, Nakamura K, Kondo K, Akiyama H, Teshima R, Mano J, Kitta K. 

    Comparison of DNA extraction methods for sweet corn and processed sweet corns. Shokuhin Eiseigaku Zasshi.

    2013;54(4):309-315.


 

관련제품

Catalog No.

Product Name

Size

317-06361

GM quicker, GMO DNA Extraction Kit for Grain

50 tests

317-07341

On - Site Column Set for GM quicker

20 tests

317-07341

GM quicker 2, GMO DNA Extraction Kit for rice & potato

50 tests

319-07161

GM quicker 96

96 well plate x 4l

314-06371

GE1 Buffer

500 ml

311-06381

GE2 Buffer

200 ml

318-06651

GE2 - K Buffer

100 ml

315-06661

 GB3 Buffer

25 ml

311-06641

GW Buffer

80 ml

318-06391

RNase A (100mg / ml)

2.5 ml

316-90025

TE (pH8.0)

500 ml

312-06671

GM quicker 2 Enzyme Set

(Proteinase K:2 ml, α-Amylase:0.1 ml×2)

1 set


 

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Catalog No.

Product Name

Size

311-07241

GM quicker 3

50 tests


 

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제조원 ; Nippon Gene Co., Ltd.