Nippon Gene
 
작성일 : 14-03-12
[Nippon Gene] GMO DNA Extraction Kit for rice & potato
GM Quicker 2

GM quicker 2, GMO DNA Extraction Kit for rice & potato

 

GM quicker 2는 쌀을 포함한 곡물에서 DNA를 추출하기 위한 키트입니다. 본 키트는 chaotropic ion 존재 하에서 DNA가

실리카에 흡착하는 원리 (Boom Technology)를 사용하고 있어, 추출 작업에 phenol과 chloroform 등 독성 유기용매를 사용하

지 않습니다. 유전자변형농산물 (GMO)의 검사에서는 DNA를 이용한 방법이 널리 보급되고 있습니다만, 지금까지의 식물 DNA

출 키트는 추출 대상을 "잎" 이라고 하고 있었기 때문에 곡물에서 DNA 추출에는 항시 효율적이지 않았습니다.  본 키트는

추출 대상을 알갱이로 특화시켜 약 40분 이라는 짧은 시간에 높은 정제도의 DNA를 추출 할 수 있습니다. 또한, 본 키트는 α -

아밀라아제를 사용하여, 멥쌀 뿐만 아니라 찹쌀에도 적용할 수 있도록 개발되어 미지의 쌀 시료 검사에도 사용이 가능합니다.

사용되는 spin column은 컬럼 용적을 최대한 확보하고, 내부 밀봉된 실리카 겔 막(membrane)은 충분한 DNA 흡착 용량과

높은 용출 효율을 확보하고 있습니다.

본 키트에 의해 추출된 DNA는 PCR과 제한효소 반응에 적용할 수 있습니다.

 


특징

 

  • 쌀 및 감자에서 약 40분에 높은 정제도의 DNA를 추출 할 수 있습니다.
  • 추출 조작에 페놀과 클로로포름 등 독성 유기용매를 사용하지 않습니다.
  • 시료의 cross contamination이 되지 않도록 설계되어 있습니다.
  • 추출한 DNA는 PCR과 제한효소 반응에 그대로 사용 할 수 있습니다

 

키트 구성

구성품명

용량

저장

GE1 Buffer

40 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

GE2 Buffer

5 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

GB3 Buffer

12.5 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

GW Buffer

40 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

TE ( pH8.0 )

10 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

Proteinase K

1 ml x 1 개

냉동보관 (- 20℃)

α-Amylase (고농도)

0.1 ml x 1 개

냉동보관 (- 20℃)

RNase A (100mg/ml)

0.5 ml × 2 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

Spin Column

 50 개

냉장 보관 (2 ~ 10℃)

설명서

1 부

-

• RNase A는 실온 보관이 가능하지만, 장기간 사용하지 않을 경우에는 냉장보관 (2 ~ 8℃)을 권장합니다.

• GW Buffer에는 에탄올이 포함되어 있기 때문에, 증발을 방지하기 위해 반드시 뚜껑을 닫아주세요.

• 구성품의 spin column은 냉장보관 (2 ~ 10℃)을 해야 높은 DNA 수율을 유지할 수 있습니다. 키트에 포함된

  "Spin Column"은 제품을 받는 즉시, 냉장 보관 (2 ~ 10℃) 하여 주세요.

 

 

사용법 1 : 쌀에서의 DNA 추출

 1. 쌀을 food mill 등으로 분쇄, 쌀 분말 시료를 준비합니다.

 2. 2ml 튜브에 0.5g의 쌀 분말 시료와 700μl의 GE1 Buffer, 20μl 의 proteinase K, 2μl의 α - Amylase 

    및 10μl의 RNase A를 각각 첨가하여, vortex mixer로 30초간 교반합니다.

 3. 15분간 60℃에서 가온합니다

 4. 85μl의 GE2-K Buffer를 첨가하여 vortex mixer로 잘 혼합합니다.

 5. 원심분리 (≧ 13K × g, 5분간 실온) 합니다.

 6. 상청액 400μl 정도를 1.5ml의 새 튜브로 옮깁니다.

 7. 150μl의 GB3 Buffer를 첨가 한 후 150μl의 isopropanol을 첨가하여 10 ~ 12회 튜브를 강하게 뒤집어

    잘 혼합합니다.

 8. #7의 혼합액을 Spin Column에 전량 옮기고, 원심분리 (13K × g, 30초 동안 실온) 하고 여과액은 폐기합니다.

 9. 650μl의 GW Buffer를 Spin Column에 첨가 한 후, 원심분리 (13K × g, 60초 동안 실온) 하고 여과액은 폐기합니다.

10. Spin Column을 새 1.5 ml 마이크로 튜브에 옮깁니다.

11. 50μl의 TE (pH8.0)을 떨어뜨린 후 3분간 실온에 방치합니다.

12. 원심분리 (13K × g, 60초 동안 실온) 하고 여과액을 회수합니다.

 

사용법 2 : 쌀 한 알에서의 DNA 추출

 1. 쌀 한 알을 f알루미늄 호일 등으로 싸서 망치 등으로 분쇄, 쌀 분말 시료를 준비합니다.

 2. 1.5ml 튜브에 쌀 분말 시료와 250μl의 GE1 Buffer, 10μl 의 proteinase K, 2μl의 α - Amylase 

    및 5μl의 RNase A를 각각 첨가하여, vortex mixer로 30초간 교반합니다.

 3. 15분간 60℃에서 가온합니다

 4. 40μl의 GE2-K Buffer를 첨가하여 vortex mixer로 잘 혼합합니다.

 5. 원심분리 (≧ 13K × g, 5분간 실온) 합니다.

 6. 상청액 200μl를 1.5ml의 새 튜브로 옮깁니다.

 7. 75μl의 GB3 Buffer를 첨가 한 후 75μl의 isopropanol을 첨가하여 10 ~ 12회 튜브를 강하게 뒤집어

    잘 혼합합니다.

 8. #7의 혼합액을 Spin Column에 전량 옮기고, 원심분리 (13K × g, 30초 동안 실온) 하고 여과액은 폐기합니다.

 9. 650μl의 GW Buffer를 Spin Column에 첨가 한 후, 원심분리 (13K × g, 60초 동안 실온) 하고 여과액은 폐기합니다.

10. Spin Column을 새 1.5 ml 마이크로 튜브에 옮깁니다.

11. 50μl의 TE (pH8.0)을 떨어뜨린 후 3분간 실온에 방치합니다.

12. 원심분리 (13K × g, 60초 동안 실온) 하고 여과액을 회수합니다.

 

사용법 3 : 생 감자에서의 DNA 추출

 1. 생 감자를 칼을 이용하여 약 3mm 크기의 주사위 모양으로 잘게 절단한다.

 2. 1.5ml 튜브에 0.3g의 생 감자 분말시료와 500μl의 GE1 Buffer, 4μl의 RNase A 를 각각 첨가하여 pestle로 잘 분쇄 한

    후 vortex mixer로 30초간 교반합니다.

 3. 85μl의 GE2-K Buffer를 첨가하여 vortex mixer로 잘 혼합합니다.

 4. 원심분리 (≧ 13K × g, 5분간 실온) 합니다.

 5. 상청액 400μl를 1.5ml의 새 튜브에 옮깁니다.

 6. 150μl의 GB3 Buffer를 첨가 한 후 150μl의 isopropanol을 첨가하여 10 ~ 12회 튜브를 강하게 뒤집어  잘 혼합합니다.

 7. #6의 혼합액을 Spin Column에 전량 옮기고, 원심분리 (13K × g, 30초 동안 실온) 하고 여과액은 폐기합니다.

 8. 650μl의 GW Buffer를 Spin Column에 첨가 한 후, 원심분리 (13K × g, 60초 동안 실온) 하고 여과액은 폐기합니다.

 9. Spin Column을 새 1.5ml 튜브에 옮깁니다.

10. 50μl의 TE (pH8.0)을 떨어뜨린 후 3분간 실온에 방치합니다.

11. 원심분리 (13K × g, 60초 동안 실온) 하고 여과액을 회수합니다.

 

실험 예

1. 쌀 한 알에서의 DNA 추출

   본 키트를 사용하여 쌀 한 알에서 DNA를 추출하였다. 모든 쌀 알에서 DNA를 추출 할 수 있었다.

   본 키트로 추출한 DNA 50μl 중 20μl 량을 1% Agarose S에서 전기영동했다.

 

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 Lane 1, 5 : OneSTEP Marker 6 (λ / StyⅠ digest)

 Lane 2 : Koshihikari un-polished rice genomic DNA

 Lane 3 : Koshihikari polished rice genomic DNA

 Lane 4 : Koshihikari cooked rice genomic DNA

 

 

2. 쌀 한 알에서 추출한 DNA의 PCR

   본 키트를 사용하여 추출한 쌀 (Koshihikari) 한 알에서의 DNA 샘플 0.1μl 를 주형으로 Koshihikari 특이적인 영역을

   PCR로 증폭하였다. PCR 산물의 일부 (10μl)를 2% Agarose S gel로 전기영동 하였다.

 

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Lane 1, 6 : OneSTEP Marker 4 (φX174 / Hae III digest)

Lane 2 : Koshihikari un-polished rice genomic DNA 를 주형으로 증폭

Lane 3 : Koshihikari polished rice genomic DNA

Lane 4 : Koshihikari cooked rice genomic DNA genomic DNA 를

            주형으로 증폭

Lane 5 : no template control

 

 

3. 쌀 알로부터 DNA 추출 및 제한효소 digest

   본 키트로 각종 쌀 알에서 추출한 DNA를 제한효소 EcoR I로 digest 했다.

 

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Lane 1, 8 : OneSTEP Marker6 (λ / Sty I digest)

Lane 2 : Koshihikari genomic DNA intact

Lane 3 : Koshihikari genomic DNA digest / EcoR I

Lane 4 : 타이 쌀 genomic DNA intact

Lane 5 : 태국 쌀 genomic DNA / EcoR I

Lane 6 : 찹쌀 genomic DNA intact

Lane 7 : 찹쌀 genomic DNA / EcoR I

 

 

관련제품

Catalog No.

Product Name

Size

317-06361

GM quicker, GMO DNA Extraction Kit for Grain

50 tests

317-07341

On - Site Column Set for GM quicker

20 tests

311-07241

GM quicker 3

50 tests

319-07161

GM quicker 96

96 well plate x 4l

314-06371

GE1 Buffer

500 ml

311-06381

GE2 Buffer

200 ml

318-06651

GE2 - K Buffer

100 ml

315-06661

 GB3 Buffer

25 ml

311-06641

GW Buffer

80 ml

318-06391

RNase A (100mg / ml)

2.5 ml

316-90025

TE (pH8.0)

500 ml

312-06671

GM quicker 2 Enzyme Set

(Proteinase K:2 ml, α-Amylase:0.1 ml×2)

1 set

 


Ordering information


Catalog No.

Product Name

Size

310-06591 (PDF)

GM quicker 2, GMO DNA Extraction Kit for rice & potato

50 tests

 

 

GMO related products  (PDF)

 

 

제조원 ; Nippon Gene Co., Ltd.