Nippon Gene
 
작성일 : 14-03-10
[Nippon Gene] GM quicker, GMO DNA Extraction Kit for grain


GM quicker, GMO DNA Extraction Kit for grain

 

GM quicker는 옥수수와 콩 등의 곡물에서 DNA를 추출하기 위한 키트입니다. 본 키트는 chaotropic ion 존재 하에서 DNA가

실리카에 흡착하는 원리 (Boom Technology)를 사용하고 있어, 추출 작업에 phenol과 chloroform 등 독성 유기용매를 사용하

지 않습니다. 유전자변형농산물 (GMO)의 검사에서는 DNA를 이용한 방법이 널리 보급되고 있습니다만, 지금까지의 식물 DNA

출 키트는 추출 대상을 "잎" 이라고 하고 있었기 때문에 옥수수와 대두 등의 알갱이에서 DNA 추출에는 항시 효율적이지 않

았습니다.  본 키트는 추출 대상을 알갱이로 특화시켜 약 45분 이라는 짧은 시간에 높은 정제도의 DNA를 추출 할 수 있습니

다. 또한, 본 키트는 검사용 시료의 조제에 있어서의 cross contamination 등, 추출 조작상의 문제에 대한 배려되어 설계되어

습니다. 또한 본 키트에 사용되는 spin column은 컬럼 용적을 최대한 확보하고, 내부 밀봉된 실리카 겔 막(membrane)은

충분한 DNA 흡착 용량과 높은 용출 효율을 확보하고 있습니다.


 

특징


  • 알갱이에서 약 45분에 높은 정제도의 DNA를 추출 할 수 있습니다.
  • 추출 조작에 페놀과 클로로포름 등 독성 유기용매를 사용하지 않습니다.
  • 시료의 cross contamination이 되지 않도록 설계되어 있습니다.
  • 추출한 DNA는 PCR과 제한효소 반응에 그대로 사용 할 수 있습니다


키트 구성

구성품명

용량

저장

GE1 Buffer

100 ml × 3 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

GE2 Buffer

37.5 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

GB3 Buffer

12.5 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

GW Buffer

40 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

TE ( pH8.0 )

10 ml × 1 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

RNase A (100mg/ml)

0.5 ml × 2 개

실온 보관 (15 ~ 25℃)

Spin Column

 50 개

냉장 보관 (2 ~ 10℃)

설명서

1 부

-

• RNase A는 실온 보관이 가능하지만, 장기간 사용하지 않을 경우에는 냉장보관 (2 ~ 8℃)을 권장합니다.

• GW Buffer에는 에탄올이 포함되어 있기 때문에, 증발을 방지하기 위해 반드시 뚜껑을 닫아주세요.

• 구성품의 spin column은 냉장보관 (2 ~ 10℃)을 해야 높은 DNA 수율을 유지할 수 있습니다. 키트에 포함된 "Spin Column"은

   제품을 받는 즉시, 냉장 보관 (2 ~ 10℃) 하여 주세요.

 


사용법 1 : 옥수수에서의 DNA 추출

 1. 옥수수 씨앗을 food mill 등으로 분쇄, 옥수수 분말 시료를 준비합니다.

 2. 50ml 튜브에 1g의 옥수수 분말 시료와 6ml의 GE1 Buffer 및 20μl의 RNase A를 각각 첨가하여, 볼텍스 믹서로 30초간

    교반합니다.

 3. 10분간 실온에 방치합니다

 4. 750μl의 GE2 Buffer를 첨가하여 10~12회 튜브를 세게 뒤집어 잘 혼합합니다.

 5. 10분간 얼음에 방치합니다.

 6. 원심분리 (≧ 5K × g, 10분, 4℃) 합니다.

 7. 상청액 4ml 정도를 50ml의 새 튜브로 옮깁니다.

 8. #7에서 회수한 상청액의 400μl를 1.5ml 마이크로 튜브에 옮기고 남은 상청액은 4℃에서 저장합니다.

 9. 50μl의 GB3 Buffer를 첨가합니다.

10. 200μl의 에탄올을 첨가하여 10~12회 튜브를 세게 뒤집어 잘 혼합합니다.

11.#10의 혼합액을 Spin Column에 전량 옮기고, 원심분리 (13K × g, 30초 동안 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

12. 600μl의 GW Buffer를 Spin Column에 첨가 한 후, 원심분리 (13K × g, 60초 동안 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

13. Spin Column을 새 1.5 ml 마이크로 튜브에 옮깁니다.

14. 50μl의 TE (pH8.0)을 떨어뜨린 후 3분간 실온에 방치합니다.

15. 원심분리 (13K × g, 60초 동안 4℃) 하고 여과액을 회수합니다.


사용법 2 : 대두에서의 DNA 추출

 1. 대두 씨앗을 food mill 등으로 분쇄 , 대두 분말 시료를 준비합니다.

 2. 50ml 튜브에 1g의 대두 분말 시료와 12ml의 GE1 Buffer 및 40μl의 RNase A 를 각각 첨가하여, 볼텍스 믹서로 30초간

    교반합니다.

 3. 10분간 실온에 방치합니다.

 4. 1.5ml의 GE2 Buffer를 첨가하여 10~12회 튜브를 세게 뒤집어 잘 혼합합니다.

 5. 10분간 얼음에 방치합니다.

 6. 원심분리 (≧ 5K × g, 10분, 4℃) 합니다.

 7. 상청액 8ml 정도를 50ml의 새 튜브로 옮깁니다.

 8. #7에서 회수한 상청액의 700μl를 2ml 마이크로 튜브에 옮기고 남은 상청액은 4℃에서 저장합니다.

 9. 250μl의 GB3 Buffer를 첨가합니다.

10. 250μl isopropanol을 첨가하여 10~12회 튜브를 세게 뒤집어 잘 혼합합니다.

11. #10에서 얻은 600μl의 혼합액을 Spin Column에 옮기고, 원심분리 (13K × g, 30초 동안 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

12. #10에서 얻은 나머지 혼합액 전량을 #11의 Spin Column에 옮기고 원심 (13K × g, 30초 동안 4℃) 하고 여과액은

     폐기합니다.

13. Spin Column에 600μl의 GW Buffer를 첨가 한 후, 원심분리 (13K × g, 60초 동안 4℃) 하고 여과액은 폐기합니다.

14. Spin Column을 새로운 1.5ml 마이크로 튜브에 옮깁니다.


실험 예

1. 옥수수 및 대두 씨앗에서의 DNA 추출

   본 키트를 사용하여 옥수수와 대두 씨앗에서 DNA를 추출하였다.

   두 씨앗 모두에서 DNA를 추출 할 수 있었다. 본 키트로 추출한 DNA의 1/25의 양을 1% Agarose S로 전기 영동했다.


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Lane 1, 8 : OneSTEP Marker 6 (λ/StyⅠdigest)

Lane 2 ~ 4 : 옥수수 genomic DNA

Lane 5 ~ 7 : 대두 genomic DNA



2. 옥수수 및 대두 씨앗에서 추출한 DNA의 restriction enzyme digest

   본 키트로 추출한 DNA를 제한 효소 EcoR Ⅰ과 Hind Ⅲ로 digest


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Lane 1,8 : OneSTEP Marker6 ( λ / Sty I digest )

 Lane 2 : 옥수수 genomic DNA intact

 Lane 3 : 옥수수 genomic DNA digest / EcoR I

 Lane 4 : 옥수수 genomic DNA digest / HindIII

 Lane 5 : 대두 genomic DNA intact

 Lane 6 : 대두 genomic DNA / EcoR I

 Lane 7 : 대두 genomic DNA / Hind III



3. PCR에 의한 endogenous 유전자의 검출

   옥수수와 대두의 endogenous 유전자 검출용 프라이머를 이용하여 본 키트에서 추출한 DNA의 PCR을 수행하였다 .

   PCR 조건은 농림수산성 "재조합 식품검사, 분석매뉴얼"에 따랐다.


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Lane 1, 8 : OneSTEP Marker 11 ( pUC19/Msp Ⅰ digest )

Lane 2 ~ 4 : 옥수수 genomic DNA를 주형으로 SSIIb 유전자를 증폭 (151 bp)

Lane 5-7 : 대두 genomic DNA를 주형으로 Le1 유전자를 증폭 (118 bp)


 

아래의 제품은, GM quicker 구성품의 Buffer (단품 판매 있음)와 함께 사용하여, 큰 장비(원심분리기 등)를 사용하지 않고 식물조직에서 DNA를 신속하게 추출, 정제하는 것이 가능한 2종류의 컬럼 세트로 구성되어 있습니다.


On-Site Column Set for GM quicker


본 제품은 2개의 컬럼으로 구성된 제품입니다. GM quicker 구성품의 Buffer와 함께 사용하면 식물조직에서 DNA를 신속하게

추출, 정제 할 수 있습니다. 많은 DNA 추출 키트에서 필요로 하는 큰 장비 (원심분리기 등)를 사용하지 않고서도 DNA의 추출

이 가능하며 충분한 설비가 갖추어져 있지 않아도, 지금까지의 키트와 거의 비슷한 품질의 DNA 용액을 얻을 수 있습니다.

본 제품은 컬럼과 연결된 진공채혈관이나 주사기에 의해 송액(送液) 합니다. Membrane 투과 후의 용액은 진공채혈관과

주사기 내에 축적되기 때문에 오염의 위험이 적게 DNA를 추출 할 수 있습니다.

 

실험에서는 1시료에 대해 다음 두 개의 컬럼을 사용합니다. (각 1개)

컬럼

내용

찌꺼기 제거 컬럼

 추출 찌꺼기를 제거하기 위한 여과분리 (찌꺼기 제거) 용

 (다공질 필름이 내장되어 있어 DNA 추출 후 찌꺼기를 멤브레인에 보관하고 DNA를 포함하는

 용액을 진공채혈관에 송액하기 위해 사용합니다.)

핵산 정제 컬럼

 DNA를 특이적으로 흡착하는 멤브레인이 내부에 밀봉된 DNA (핵산) 정제 용

 (실리카 멤브레인이 내부에 밀봉되어 있으며, chaotropic ion 존재 하에서 DNA가 실리카에

 흡착하는 원리를 이용하여 DNA를 정제 합니다. 이 방법은 phenol과 chloroform 등 독성

 유기용매를 사용하지 않습니다.)


또한 추출 대상을 식물조직, 특히 대두 및 옥수수 씨앗 분쇄물에 최적화 되어 있으므로, 약 30분 이라는 짧은 시간에 신속하게 DNA 용액을 얻을 수 있으며, 추출된 DNA는 PCR과 제한효소 반응에 적용 할 수 있습니다.

 


키트 구성

구성품명

용량

비고

저장

찌꺼기 제거 컬럼

20개

고무 캡 장착 됨, 노란색 봉투

실온 보관 (15℃ ~ 25℃)

핵산 정제 컬럼

20개

투명 봉투

냉장 보관 (2℃ ~  8℃)

고무 캡

20개

-

-

컬럼 홀더

1개

조립식

-

설명서

1부

-

-


준비해야 할 시약

제품명

추출에 필요한 시약량

1회

20회

GE1 Buffer

2 ml

40 ml

GE2-K Buffer

0.25 ml

5 ml

GB3 Buffer

0.5 ml

10 ml

GW Buffer

4 ml 

20 ml

TE ( pH8.0 )

0.2 ml

4 ml

RNase A (100mg/ml)

10 µl

200 µl

2-Propanol

 0.5 ml

10 ml

* 2-Propanol 외에 GM quicker에 GE2-K Buffer 및 GW Buffer를 추가로 구입 하시거나 또는 GM quicker 2에 GW Buffer를

  추가 구입하여 본 제품 20회분의 추출에 필요한 시약을 맞출 수가 있습니다.


 준비해야 할 기구 및 장비

제품명

 진공채혈관

 1.5ml 튜브

 진공채혈관 마개 캡

 필터가 부착된 튜브

 Lure adapter

 Pipetman

 채혈관 holder

 시험관 믹서

 25ml 또는 30ml 주사기

 일회용 장갑



관련제품

Catalog No.

Product Name

Size

317-07341

GM quicker 2, GMO DNA Extraction Kit for rice & potato

20 tests

311-07241

GM quicker 3

50 tests

319-07161

GM quicker 96

96 well plate x 4

314-06371

GE1 Buffer

500 ml

311-06381

GE2 Buffer

200 ml

318-06651

GE2 - K Buffer

100 ml

315-06661

 GB3 Buffer

25 ml

311-06641

GW Buffer

80 ml

318-06391

RNase A (100mg / ml)

2.5 ml

316-90025

TE (pH8.0)

500 ml

312-06671

GM quicker 2 Enzyme Set

(Proteinase K:2 ml, α-Amylase:0.1 ml×2)

1 set



Ordering informations


Catalog No.

Product Name

Size

317-06361 (PDF)

GM quicker, GMO DNA Extraction Kit for Grain

50 tests

317-07341 (PDF)

On-Site Column Set for GM quicker

20 tests

 


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제조원 ; Nippon Gene Co., Ltd.