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작성일 : 17-09-12
[Nippon Gene] ISOSPIN Fecal DNA, 분변에서 DNA의 추출, 정제 키트

 

ISOSPIN Fecal DNA, 분변에서 DNA를 추출, 정제하는 키트

 

 

분변에 최적화 된 추출액과 beads beating에 의한 물리적 파쇄의 병용으로 견고한 세포벽을 갖는 미생물로부터

DNA 추출 할 수 있습니다.  또한 정제 과정에서 자체 개발한 spin column을 사용하고 있으며, 페놀 및 클로로포름

등의 독성 유기 용매를 사용하지 않고 신속, 간편하게 DNA를 정제 할 수 있습니다.

 

 

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특징;

• 대변에서 순도 높은 DNA가 높은 수율로 얻을 수 있습니다.

• 조작 시간 30분 ~ 1시간 30분으로 추출, 정제를 할 수 있습니다.

• 분변에 최적화 된 추출액과 beads에 의한 물리적 파쇄의 병용으로, 견고한 세포벽을 갖는 미생물에서의 DNA

  추출이 가능합니다.

• RNase A가 첨부되어 있어, RNA의 혼입이 적은 DNA 용액을 얻을 수 있습니다.

※ 본 제품의 사용에는 별도 beads type 분쇄기(2mL 튜브 대응)가 필요합니다.

 

 

Standard protocol;

표준 프로토콜은 beads beating에 의한 물리적 파쇄의 병용으로 견고한 세포벽을 갖는 미생물에서의 DNA를 추출

할 수 있습니다. 또한 DNA의 물리적 전단(shearing)을 피하고 싶은 경우에는 beads beating을 하지 말고, 열처리

법에 의한 추출 프로토콜을 사용하세요.

 

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Performance data;

 

분변에서 DNA 수율 비교 데이터

각사 제품를 사용하여, 분변에서 DNA를 추출한 후 흡광도에서 DNA의 수율을 비교했다.

분변 샘플량은 각 제품의 프로토콜에 따랐다.

   

제조사

분변 양 (mg)

DNA 수율 (ug)

분변 1mg 당 DNA 수율 (ug/mg)

ISOSPIN Fecal DNA

(표준 프로토콜)

200 

 24.27

0.121

ISOSPIN Fecal DNA

(열처리 프로토콜) 

200

25.26

0.126

A 사

250

2.42

0.010

B 사

200 

8.46

0.042

C 사

500

23.33 

0.047

                       

Nippon Gene의 ISOSPIN Fecal DNA가 타사 제품에 비해 높은 수익률 DNA를 얻었다.

 

 

각사 제품에서 추출한 분변 DNA의 전기 영동 비교

각사 키트에서 추출한 DNA를 흡광도 측정 결과에 따라 200ng으로 정렬 한 후 전기 영동을 실시했다.

(영동 조건 : 1 % Agarose S/TAE)

 

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 M : Marker6 (λ / StyI digest)

③ : A 사

 ① : ISOSPIN Fecal DNA (표준 프로토콜)

④ : B 사

 ② : ISOSPIN Fecal DNA (열처리 프로토콜)

⑤ : C 사

 

ISOSPIN Fecal DNA는 타사 제품보다 signal 강도가 강한 band가 검출 되었다. 타사 제품은 DNA 이외의 불순물이

흡광도에 영향을 주고 있다고 생각되며, 본 제품으로는 더 높은 순도의 DNA를 얻을 수 있는 것이 시사되었다.

 

 

각사 제품에서 추출한 대변 DNA의 흡광도 비교

각사 키트에서 추출한 DNA의 흡광도의 평균치 (n = 3)를 산출하고, 260nm의 Abs를 1에 맞춰 비교했다.

 

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Nippon Gene의 ISOSPIN Fecal DNA는 타사 제품과 비교하여 높은 순도의 DNA를 얻었다.

 

 

실험 예, 사람 배설물에서 Bifidobacterium속 검출

본 제품과 A사, B사 분변 DNA 추출 키트를 사용하여 0.2g의 사람 배설물에서 DNA 용액을 얻었다.

흡광도 측정 결과에 따라 정량한 5ng의 DNA를 주형으로 Bifidobacterium 속을 검출하는 프라이머와 프로브 및

DirectAce qPCR Mix plus ROX Tube (Code No : 318-07751)를 이용하여 Ct 값을 비교했다.

 

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PCR 장치 : ABI7500 Fast System (ThermoFisher Scientific 사)

 

ISOSPIN Fecal DNA에서 추출한 DNA를 이용한 경우, A사 및 B사 분변 DNA 추출 키트에서 얻은 DNA 용액보다

낮은 Ct 값을 보여 주었다. ISOSPIN Fecal DNA는 사람 분변 중의 Bifidobacterium속 같은 그람 양성균에서

효율적으로 DNA를 얻는 것이 가능하다는 것은 보여 주었다.

 

 

키트 구성;

구성품명

용량

저장

FE1 Buffer

35 ml × 1

실온 보관

FE2 Buffer

4.5 ml × 1

FB Buffer

40 ml × 1

FW Buffer

40 ml × 1

TE (pH 8.0)

5 ml × 1

RNase A (100 mg/ml)

0.5 ml × 1

Beads Tube

 50 개 × 1

Spin Column

50 개 × 1

 

 

 

Ordering information;

    

Catalog No.

Product Name

Size

315-08621

ISOSPIN Fecal DNA

50 tests

 

 

제조원 ; Nippon Gene Co., Ltd.